Stress oxydatif et défenses antioxydantes chez le chien
L’analyse de la capacité globale de défenses antioxydantes et du stress oxydatif est un outil précieux pour le suivi de santé et de bien-être de l‘animal de compagnie, en particulier le chien.
Les Laboratoires de Recherches Appliquées SPIRAL et le Centre Européen de Recherche et d’Analyses ont réalisé de nombreuses études permettant d’évaluer le stress oxydatif et les défenses antioxydantes chez le chien de compagnie.
Nous en donnons ici un exemple.
Analyses effectuées sur une population de 25 chiens âgés de 3 à 10 ans (3 à 47 kg, 11 mâles et 14 femelles) :
- Statut RedOx : GSH et GSSG
- Défenses antioxydantes :test biologique KRL,Test ABTS®, SOD, GPx et catalase
- Marqueurs du stress oxydatif : MDA,Protéines carbonylées,8-OHdG, 8-isoprostanes
Tests réalisés pour l’évaluation des défenses antioxydantes
KRL : Test biologique KRL de mesure du potentiel global de défenses antioxydantes
Le test biologique KRL™ permet l’évaluation dynamique du potentiel global de défense antioxydante d’un individu ou d’un animal. Le sang total ou une suspension d’érythrocytes est soumis à un stress oxydatif standardisé. Les défenses antioxydantes extracellulaires et intracellulaires contribuent à maintenir l’intégrité cellulaire jusqu’à l’hémolyse. La résistance du sang total et des globules rouges est exprimée par le temps nécessaire pour atteindre 50 % de l’hémolyse totale.
GSH+GSSG : glutathion réduit et oxydé
Les concentrations de glutathion sous forme réduite ou oxydée constituent un bon marqueur de l’équilibre RedOx. Les concentrations en glutathion réduit et oxydé (GSH et GSSG) dans le sang total ont été mesurées simultanément par chromatographie liquide haute performance (HPLC) en phase inverse avec détection UV (200 nm).
TAS : ABTS® test
Ce dosage chimique repose sur la capacité des antioxydants présents dans l’échantillon à inhiber l’oxydation de l’ABTS® (2,2′-Azino-di-[3-éthylbenzthiazoline sulfonate]) en ABTS®-+. La quantité d’ABTS®-+ produite est contrôlée par lecture de l’absorbance à 405 nm.
SOD : superoxyde dismutase
Des radicaux superoxydes sont générés par l’oxydation et l’hypoxanthine en présence de xanthine oxydase. Une partie de ces radicaux est pris en charge par la superoxyde dismutase (SOD) présente dans l’échantillon plasmatique et l’excédent est dosé via une réaction colorimétrique. Le dosage de la SOD mesure les trois types de SOD (Cu/Zn, Mn et Fe-SOD).
GPx : glutathion peoxydase
L’activité de la glutathion peroxydase (GPx) plasmatique est mesurée indirectement par une réaction couplée avec la glutathion réductase (GR). Le glutathion oxydé (GSSG), produit lors de la réduction de l’hydroperoxyde par la GPx, est recyclé à l’état réduit par la GR et le NADPH. L’oxydation du NADPH en NADP+ s’accompagne d’une diminution de l’absorbance à 340 nm. La vitesse de diminution de l’absorbance est directement proportionnelle à l’activité de la GPx dans l’échantillon.
CAT : Catalase
La méthode est basée sur la réaction de la catalase (CAT) avec le méthanol en présence de H2O2. Le formaldéhyde produit est mesuré par colorimétrie en présence du chromogène Purpald.
Tests réalisés pour l’évaluation du stress oxydatif
MDA : malondialdéhyde plasmatique
Le niveau de malondialdéhyde (MDA) dans le plasma a été déterminé par CLHP en phase inverse avec détection par fluorimétrie (515/553 nm) après dérivatisation du MDA avec de la dinitrophénylhydrazine (DNPH).
Protéines carbonylées
Le dosage colorimétrique des protéines carbonylées dans le plasma utilise la réaction DNPH pour mesurer la teneur en protéines carbonylées dans le plasma. La quantité d’hydrozone protéique produite est quantifiée par spectrophotométrie à une absorbance de 375 nm. La teneur en carbonyle est normalisée en fonction de la concentration en protéines.
8-OHdG
Le dosage immunologique (test ELISA par compétition) pour la mesure des dommages oxydatifs de l’ADN/ARN détecte les trois espèces de guanine oxydée : la 8-hydroxy-2′-déoxyguanosine (8-OHdG) de l’ADN, la 8-hydroxyguanosine de l’ARN et la 8-hydroxyguanine de l’ADN ou de l’ARN. L’avantage est qu’il capture un ensemble plus complet de produits biologiquement pertinents de dommages oxydatifs que les tests limités à l’analyse de la seule 8-hydroxy-2′-déoxyguanosine.
8-isoprostanes
Le dosage immunologique (test ELISA par compétition) de 8-Isoprostane est utilisé pour la quantification du 8-isoprostane dans le plasma.
Stress oxydatif et défenses antioxydantes chez le chien
Nos laboratoires ont participé à de nombreuses études cliniques chez l’animal (animaux d’élevage, animaux de rente, animaux de compagnie, animaux de laboratoire, faune sauvage)
Le Ministère de l’Enseignement supérieur et de la Recherche a accordé à LARA SPIRAL et au CEDRA l’agrément en tant qu’organismes exécutant des travaux de recherche et développement pour le compte d’entreprises.
Pour en savoir plus …
… sur les analyses physicochimiques proposées par le CEDRA
… sur les analyses biochimiques et biologique proposées par LARA SPIRAL
… sur les analyses de défenses antioxydantes et de stress oxydatif proposées par LARA SPIRAL
… sur le suivi de la santé animale