Défenses Antioxydantes et Stress Oxydatif

L’équilibre de la balance RedOx est reconnu comme étant un enjeu important pour le bien-être et la santé.  Un déséquilibre de cette balance se produit lorsque les défenses antioxydantes ne sont plus suffisantes pour empêcher l’apparition d’un stress oxydatif.

Les laboratoires du groupe SPIRAL ont mis en place un ensemble d’outils analytiques permettant d’évaluer l’état de stress oxydatif et le potentiel de défenses antioxydantes, aussi bien chez l’homme et l’animal que dans les végétaux, les aliments, les boissons, les compléments alimentaires…

Les Laboratoires de Recherches Appliquées SPIRAL ont ainsi développé un test biologique innovant de mesure du potentiel global de défenses antioxydantes : le Test KRL™.

Lire l’article consacré à la balance RedOx et au stress oxydatif

Feuille

Analyses de produits
Produits végétaux
Extraits

Fraise

Analyses de produits
Alimentation
Nutraceutiques

pictogramme vache

Santé animale
Nutrition
Bien-être

Logo pharmacie

Santé humaine
Nutrition
Bien-être

Dosage des antioxydants dans les produits naturels

Bioressources
Profil HPLC polyphénols

Profil HPLC d’un extrait de polyphénols

Estimation globale de la teneur en biomolécules antioxydantes d’un extrait naturel (aliment, boisson, complément alimentaire, extrait végétal…) :

polyphénols totaux

pigments anthocyanes

flavonoïdes

caroténoïdes totaux  (xanthophylles et carotènes).

Profil chromatographique des composés phénoliques présents dans un extrait : acides phénoliques, stilbènoïdes (resvératrol), flavonoïdes (flavones, flavonols, flavanones, flavanols, proanthocyanidines, isoflavones, anthocyanes).

Profil chromatographique des pigments anthocyanes dans un extrait

Profil chromatographique des caroténoïdes (carotènes et xanthophylles) d’un extrait.

 

Lire l’article à propos des polyphénols

Evaluation des défenses antioxydantes

Le Test biologique KRL™ de mesure de capacité globale de défenses antioxydantes

Test biologique KRL

Test biologique KRL de mesure du potentiel global de défenses antioxydantes. Courbe de mesure de la cinétique d’hémolyse par un générateur de radicaux libres.

Logo KRL

Le test KRL™ (Kit Radicaux Libres) est un test biologique de mesure de la capacité globale de défenses antioxydantes.

Le test KRL™, développé dans nos laboratoires, permet de mesurer de façon dynamique la capacité d’un échantillon à protéger des cellules sanguines soumises à une agression par des radicaux libres dans des conditions standardisées. La capacité globale de défenses antioxydantes est donnée par l’augmentation de la durée de résistance à l’hémolyse par rapport à un témoin. Les résultats sont standardisés en équivalents Trolox (équivalent soluble de vitamine E) ou acide gallique (composé phénolique).

L’intérêt du test biologique KRL™ est qu’il tient compte à la fois des défenses extracellulaires, intracellulaires et de la synergie des deux.

Le Test KRL est le test de mesure de la capacité de défenses antioxydantes se rapprochant le plus des conditions in-vivo.

Un test de diagnostic pour l’humain et l’animal

Le test biologique KRL™ est couramment utilisé comme test de diagnostic in-vitro pour mesurer, sur sang total et sur culot d’hématies, la capacité globale de défenses antioxydantes d’un individu (homme, animal).

Le test biologique KRL™ peut aussi être utilisé, dans le cadre d’études
cliniques ou précliniques, pour mesurer le potentiel global de défenses
antioxydantes (ou pro-oxydantes) d’un produit (complément alimentaire,
aliment ou boisson…) ou d’un mode de vie (stress psychologique,
sédentarité, tabagisme…)

Un test pour évaluer in-vitro la capacité antioxydante de produits

Nos laboratoires réalisent régulièrement avec le test biologique KRL™ des mesures de capacité globale antioxydante (ou pro-oxydante) des produits qui nous sont confiés. 

Pour en savoir plus sur le Test biologique KRL™ :

Tests chimiques d'évaluation des défenses antioxydantes ...

Nos laboratoires peuvent réaliser la plupart des tests antioxydants classiques.

Le Test colorimétrique DPPH (2,2-DiPhenyl-1-PicrylHydrazyl) est basé sur la réduction du radical 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH). Les résultats sont exprimés par rapport à une gamme d’antioxydant témoin (Trolox ou acide gallique). Tests sur produits (aliments, compléments alimentaires…) ou sur prélèvements biologiques (plasma, urine…) et lysats cellulaires.

Le test ABTS, aussi appelé test TEAC (Trolox Equivalent Antioxidant Capacity), est un test colorimétrique basé sur la mesure de l’inhibition de l’oxydation de l’ABTS® (2,2’-Azino-di-[3-ethylbenzthiazoline sulphonate]) en ABTS•+ par la métmyoglobine. Les résultats sont exprimés par rapport à une gamme d’antioxydant témoin (Trolox ou acide gallique). Tests sur produits (aliments, compléments alimentaires…) ou sur prélèvements biologiques (plasma, urine…) et lysats cellulaires.

Le FRAP (Ferric Reducing Abitity of Plasma ) est un test colorimétrique basé sur la réduction à pH acide du complexe tripyridyl-triazine ferrique (Fe(III)-TPTZ)). Les résultats sont exprimés par rapport à une gamme d’antioxydant témoin (Trolox ou acide gallique). Test sur prélèvements biologiques (plasma).

Le test ORAC évalue la capacité d’un échantillon à limiter l’oxydation de la fluorescéine, une molécule fluorescente sensible à l’oxydation, par des radicaux peroxyles générés par un composé oxydant thermolabile.

Note : ces test chimiques ne permettent pas, au contraire du test KRL, d’apprécier les systèmes de défenses antioxydantes dans leur globalité.

Mesure d'activité des enzymes antioxydantes

 La Superoxyde dismutase (SOD), la glutathion peroxydase (GPx) et la catalase (Cat) sont trois enzymes majeures du système de défenses antioxydantes des cellules. Le dosage de leur activité peut aider à identifier l’origine d’une diminution ou d’une augmentation des défenses globales.

Détermination de l’activité enzymatique de la Superoxyde Dismutase (SOD).
Analyses réalisées sur culot d’hématies, plasma, lysat cellulaire, tissus.

Détermination de l’activité enzymatique de la Glutathion Peroxydase (GPx)
Analyses réalisées sur culot d’hématies, plasma, lysat cellulaire, tissus.

Détermination de l’activité enzymatique de la Catalase (Cat)
Analyses réalisées sur culot d’hématies, plasma, lysat cellulaire, tissus.

La mesure des activités antioxydantes enzymatiques est généralement réalisée en par microtitration (microplaques) sur des prélèvements biologiques (sang…)
Microplate
échantillons sanguins

Dosage des marqueurs du stress oxydatif

Un stress oxydatif peut apparaître lorsque les défenses antioxydantes s’avèrent insuffisantes pour réguler un flux d’espèces réactives de l’oxygène et de l’azote (ROS et RNS) trop important, ce qui peut être le cas en situation pathologique, à l’occasion d’un évènement inflammatoire, d’un stress.
L’excès de radicaux libres provoque alors ce qu’on appelle un stress oxydatif.

Lire l’article consacré à la balance RedOx et au stress oxydatif

Balance RedOx

Le MDA (malondialdéhyde) plasmatique est un marqueur de l’oxydation des lipides (plus particulièrement des acides gras polyinsaturés).
La mesure de MDA sur est réalisée par Chromatographie Liquide Haute Performance après réaction avec l’acide thiobarbiturique.

Le 8-isoprostane (8-epi PGF2α) est un marqueur de l’oxydation des lipides (oxydation des phospholipides)
La quantification de 8-isoprostane est réalisée par immunodosage ELISA sur plasma, urine, lysat cellulaire ou tissus.

Le 8-OHdG est un marqueur du dommage oxydatif de l’ADN et de l’ARN.
3 marqueurs sont analysés : 8-hydroxy-2′-désoxyguanosine, 8-hydroxyguanosine, 8-hydroxyguanine. La quantification de 8OHdG est réalisée par immunodosage ELISA sur plasma, urine, lysat cellulaire, tissus ou salive.

Le taux de protéine carbonyle est un marqueur de l’oxydation des protéines.
La quantification de protéine carbonyle sur plasma, urine ou lysat cellulaire est réalisée par réaction avec DNPH (2,4-dinitrophenylhydrazine).

L’association d’un taux de glutathion réduit (GSH) bas avec un taux de glutathion oxydé (GSSG) élevé (rapport GSH/GSSG effondré) est un signe évocateur de stress oxydatif récent. Ce test peut être réalisé sur sang total, suspension d’hématies ou sur d’autres tissus.

Notre équipe se tient à votre disposition pour vous conseiller dans le choix des analyses les plus pertinentes  à réaliser pour répondre à vos problématiques. N’hésitez pas à nous contacter !