Défenses Antioxydantes et Stress Oxydatif

Les laboratoires du groupe SPIRAL ont mis en place un ensemble d’outils analytiques permettant d’évaluer l’état de stress oxydatif et le potentiel de défenses antioxydantes, aussi bien chez l’homme et l’animal que chez la plante. L’équilibre de la balance RedOx est en effet reconnu comme étant un enjeu important pour le bien-être et la santé.  Cet équilibre ne peut-être obtenu sans une alimentation riche en antioxydants. C’est pourquoi nos clients nous confient régulièrement la mission de caractériser le potentiel antioxydant de leurs produits (aliments, compléments alimentaires…).
Pour réaliser ces objectifs, nous avons développé un test biologique innovant de mesure du potentiel global de défenses antioxydantes : le Test KRL™.

Lire l’article consacré à la balance RedOx et au stress oxydatif

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Antioxydants : Quantification et profil

Bioressources

Estimation globale de la teneur en composés phénoliques, en pigments anthocyanes ou en flavonoïdes d’un extrait.

Profil chromatographique des composés phénoliques présents dans un extrait : acides phénoliques, stilbènoïdes (resvétratrol), flavonoïdes (flavones, flavonols, flavanones, flavanols, proanthocyanidines, isoflavones, anthocyanes).

Profil chromatographique des pigments anthocyanes présents dans un extrait .

Estimation globale de la teneur en caroténoïdes (xanthophylles et carotènes) d’un extrait et profil chromatographique.

Evaluation des défenses antioxydantes

Le Test biologique KRL™ de mesure de capacité globale de défenses antioxydantes

Test biologique KRL

Test biologique KRL de mesure du potentiel global de défenses antioxydantes. Courbe de mesure de la cinétique d’hémolyse par un générateur de radicaux libres.

Le test KRL™ (Kit Radicaux Libres) est un test biologique de mesure de la capacité globale de défenses antioxydantes.

Le test KRL™, développé dans nos laboratoires, permet de mesurer de façon dynamique la capacité d’un échantillon à protéger des cellules sanguines soumises à une agression par des radicaux libres dans des conditions standardisées. La capacité globale de défenses antioxydantes est donnée par l’augmentation de la durée de résistance à l’hémolyse par rapport à un témoin. Les résultats sont standardisés en équivalents Trolox ou acide gallique.

L’intérêt du test biologique KRL™ est qu’il tient compte à la fois des défenses extracellulaires, intracellulaires et de la synergie des deux.
Le Test KRL est le test de mesure de la capacité de défenses antioxydantes se rapprochant le plus des conditions in-vivo.

Un test global aux multiples applications.

Le test biologique KRL™ est aussi utilisé comme test de diagnostic in-vitro pour mesurer, sur sang total et sur culot d’hématies, la capacité globale de défenses antioxydantes d’un individu (homme, animal). Il peut aussi être utilisé pour mesurer le potentiel global de défenses antioxydantes (ou pro-oxydantes) d’un produit, par rapport à la modification, induite par ce dernier, de la résistance d’un sang témoin vis-à-vis d’une agression radicalaire.

Pour en savoir plus sur le Test biologique KRL™ : Test KRL-présentation.V2.1611

Nous réalisons aussi des tests chimiques de capacité antioxydante...

Le Test colorimétrique DPPH (2,2-DiPhenyl-1-PicrylHydrazyl) est basé sur la réduction du radical 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH). Les résultats sont exprimés par rapport à une gamme d’antioxydant témoin (Trolox ou acide gallique). Tests sur produits (aliments, compléments alimentaires…) ou sur prélèvements biologiques (plasma, urine…) et lysats cellulaires.

Le test ABTS est un test colorimétrique basé sur la mesure de l’inhibition de l’oxydation de l’ABTS® (2,2’-Azino-di-[3-ethylbenzthiazoline sulphonate]) en ABTS•+ par la métmyoglobine. Les résultats sont exprimés par rapport à une gamme d’antioxydant témoin (Trolox ou acide gallique). Tests sur produits (aliments, compléments alimentaires…) ou sur prélèvements biologiques (plasma, urine…) et lysats cellulaires.

Le FRAP (Ferric Reducing Abitity of Plasma ) est un test colorimétrique basé sur la réduction à pH acide du complexe tripyridyl-triazine ferrique (Fe(III)-TPTZ)). Les résultats sont exprimés par rapport à une gamme d’antioxydant témoin (Trolox ou acide gallique). Test sur prélèvements biologiques (plasma).

... et des tests de mesure d'activités enzymatiques antioxydantes

Détermination de l’activité enzymatique de la Superoxyde Dismutase (SOD).
Analyses réalisées sur culot d’hématies, plasma, lysat cellulaire, tissus.

Détermination de l’activité enzymatique de la Glutathion Peroxydase (GPx)
Analyses réalisées sur culot d’hématies, plasma, lysat cellulaire, tissus.

Détermination de l’activité enzymatique de la Catalase (Cat)
Analyses réalisées sur culot d’hématies, plasma, lysat cellulaire, tissus.

La mesure des activités antioxydantes enzymatiques est généralement réalisée sur des prélèvements biologiques (sang…)
Microplate
échantillons sanguins

Dosage des marqueurs du stress oxydatif

Le MDA (malondialdéhyde) plasmatique est un marqueur de l’oxydation des lipides (plus particulièrement des acides gras polyinsaturés).
La mesure de MDA sur est réalisée par Chromatographie Liquide Haute Performance après réaction avec l’acide thiobarbiturique.

Le 8-isoprostane (8-epi PGF2α) est un marqueur de l’oxydation des lipides (oxydation des phospholipides)
La quantification de 8-isoprostane est réalisée par immunodosage ELISA sur plasma, urine, lysat cellulaire ou tissus.

Le 8-OHdG est un marqueur du dommage oxydatif de l’ADN et de l’ARN.
3 marqueurs sont analysés : 8-hydroxy-2′-désoxyguanosine, 8-hydroxyguanosine, 8-hydroxyguanine. La quantification de 8OHdG est réalisée par immunodosage ELISA sur plasma, urine, lysat cellulaire, tissus ou salive.

Le taux de protéine carbonyle est un marqueur de l’oxydation des protéines.
La quantification de protéine carbonyle sur plasma, urine ou lysat cellulaire est réalisée par réaction avec DNPH (2,4-dinitrophenylhydrazine).

L’association d’un taux de glutathion réduit (GSH) bas avec un taux de glutathion oxydé (GSSG) élevé (rapport GSH/GSSG effondré) est un signe évocateur de stress oxydatif récent. Ce test peut être réalisé sur sang total, suspension d’hématies ou sur d’autres tissus.

Un stress oxydatif peut apparaître lorsque les défenses antioxydantes s’avèrent insuffisantes pour réguler un flux d’espèces réactives de l’oxygène et de l’azote (ROS et RNS) trop important, ce qui peut être le cas en situation pathologique, à l’occasion d’un évènement inflammatoire, d’un stress.
L’excès de radicaux libres provoque alors ce qu’on appelle un stress oxydatif.

Lire l’article consacré à la balance RedOx et au stress oxydatif

Balance RedOx

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