Mesure d'activité antiinflammatoire
Exemple : Activité antiinflammatoire d'extraits végétaux
Nous avons évalué l’effet d’extraits végétaux riches en polyphénols sur la réponse de cellules humaines témoins vis-à-vis d’un stress inflammatoire.
Nous avons mesuré la production de 2 cytokines inflammatoires par des cellules immunitaires humaines (PBMC, Peripheral Blood Mononuclear Cell – Les cellules PBMC sont isolées à partir d’un concentré leuco-plaquettaire) mises en culture, en présence ou non d’extraits de polyphénols à différentes concentrations :
- TNFα (Tumor Necrosis Factor α)
- IL-1β (Interleukine-1)
Des cellules humaines sanguines mononuclées du sang périphérique (PBMC) mises en présence d’un stimulus endotoxinique (lipopolysaccharides bactériens ou LPS) produisent des cytokines pro-inflammatoires pouvant être dosées par méthode ELISA en mode multiplexage. L’addition dans le milieu réactionnel d’extraits de polyphénols à différentes concentrations a permis d’évaluer leur capacité à réduire la libération de ces cytotoxines.
Dosage des cytokines par technologie multiplex
Synoptique de l’essai
- Les anticorps spécifiques des cytokines analysées ont été immobilisés sur des microparticules magnétiques.
- Les anticorps immobilisés se lient aux cytokines présentes dans le surnageant de culture cellulaire.
- Après lavages, des anticorps biotinylés spécifiques des cytokines sont ajoutés dans le milieu réactionnel
- Après lavages pour éliminer les anticorps non lié, le conjugué streptavidine-phycoérythrine, est ajouté dans le milieu
- Un lavage final élimine le marqueur non lié
- Un lecteur spécifique de fluorescence permet de mesurer la quantité de chaque cytokine dans l’échantillon. Un aimant permet d’organiser les microparticules sur une seule rangée (formation d’une file). Une diode LED permet d’identifier l’analyte détecté et une seconde de déterminer l’amplitude du signal généré par la phycoérythrine qui est proportionnel à la quantité de cytokine fixée. Chaque puits est filmé avec une caméra CCD.
Dans nos conditions d’expérience, la plupart des extraits polyphénoliques ont montré une action antiinflammatoire en inhibant partiellement la production de cytokines IL-1β et TNF-α. Dans les conditions de l’expérience, le taux moyen d’inhibition de IL-1β par les extraits était supérieur à 90%.
Dosages immunologiques réalisés par les Laboratoires SPIIRAL